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本产品是一种高效的高产膜蛋白提取试剂盒。大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒可以从各种大肠杆菌菌体中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白样本含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒，也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

• 使用方便，从细菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
  
• 本品不含EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃保存，开盖使用后-20℃保存
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 每500μL冷的提取液A中加入5μL提取液B和2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 离心收集菌体，用PBS洗菌体2次。
  
• 按每100mg～150mg湿重菌体样本加入500μL冷的提取液A（大约菌体和提取液体积比1:3～1:5，完全淹没菌体即可），吹打混匀，在2～8℃振荡1～2小时，至菌体裂解完全，菌体沉淀减少。
  注：
  ● 必须在2～8℃条件下振荡，不可以室温振荡。
  ● 使用振荡器或摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。
  ● 液体量少不好振荡时，可以盖紧离心管，将离心管倾斜放置或者横置，以利于液体振荡。
  ● 如没有2～8℃持续振荡条件，也可直接置2～8℃冰箱静置1～2小时，中间每隔10分钟涡旋振荡混匀即可。
  
• 将菌体提取液在2～8℃低温下12000×g力离心5分钟，弃沉淀，取上清。
  注：
  ● 必须在2～8℃条件下离心。不可以室温离心。
  
• 将上清液在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃，1000×g离心3分钟。
  注：
  ● 此步骤必须37℃条件下离心。
  ● 入股离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。
  
• 此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约50μL液体。
  注：
  ● 下层为黏稠状液体。
  ● 未完全分好层时看上去可能像3层，保留中间的界面层即可。
  
• 用1～2倍体积的膜蛋白溶解液溶解该下层部分，即得大肠杆菌膜蛋白样品。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。